Molikula jiini iwadi ọna

Lati Ye ki o si da aba ni DNA be lo molikula jiini ọna. Fun kọọkan DNA ekun, eyi ti o topinpin yi ekun ti awọn akaşu-, pupọ tabi allele, awọn ọna yato. Abele kọọkan molikula jiini ọna ninu diẹ ninu awọn tabi awọn miiran ifọwọyi ti RNA ati DNA. Gbogbo awọn wọnyi ọna wa ni characterized nipasẹ ohun tobi pupo complexity, lai awọn ipo yàrá ko le wa ni ti gbe jade, ati ọpá gbọdọ jẹ nyara oṣiṣẹ. Ise yi ni ti gbe jade ni orisirisi awọn ipo.

ni asiko

First, RNA tabi DNA ayẹwo to ṣe. Nibi, a molikula jiini ọna le ti wa ni loo si fere eyikeyi ohun elo ti: kan ju ti ẹjẹ, leukocytes, fibroblasts asa, mukosa (scraped), ani awọn iho irun, - DNA le gba lati eyikeyi awọn ayẹwo. O ti wa ni o dara lati lo eyikeyi molikula jiini ọna ati awọn won orisirisi awọn aṣayan ki o si ti gun ti ya sọtọ DNA ti o ti fipamọ tutunini. Awọn ipele keji ti wa ni igbẹhin si awọn ikojọpọ ti awọn ti o fẹ ajẹkù (alaye) ti DNA, bi o ti iranlọwọ rii daju awọn lati damọ pq lenu ni fitiro (ni fitiro lai ilowosi ti ngbe oni). Bi awọn kan abajade, awọn ti a ti yan DNA ajeku multiplies nipa yi pq lenu, ati awọn iye ti DNA posi gangan milionu ti igba.

Awọn kẹta igbese ni molikula jiini iwadi awọn ọna ti wa ni assumed pupọ DNA hihamọ (yi Fragmentation, tearing tabi Ige). Hihamọ nipasẹ ošišẹ ti electrophoresis on a polyacrylamide tabi agarose jeli. Yi molikula-jiini ọna ti keko ni DNA ajeku faye gba gbogbo eniyan lati ya kan awọn ipo ninu awọn jeli. Nitori naa, awọn jeli ti wa ni mu pẹlu ethidium bromide, o lagbara ti abuda to DNA, awọn itanna pẹlu ultraviolet ina, ki o si jẹ ṣee ṣe lati mo daju luminescence ipin. Molikula jiini aisan ọna wa orisirisi ati afonifoji, ṣugbọn awọn akọkọ meji awọn igbesẹ ti o wa wọpọ si gbogbo. Sugbon ni ibere lati da DNA ajẹkù, awọn jeli le ti wa ni awọ, ati ọpọlọpọ awọn miiran tẹlẹ ọna.

eya

Awọn julọ taara ati ni ibigbogbo ọna fun wakan mycobacteria le ni awọn loke molikula jiini DNA eko ọna. Awọn oniwe-lodi ni wipe, ni ibere lati da awọn ọlọjẹ pq awọn ohun elo ti ti kan pato ajẹkù ti DNA ti pathogens. Molikula jiini aisan ni imuposi ma ko sibẹsibẹ ni a siwaju sii daradara ona lati da iru arun bi iko. Lilo awọn lati damọ pq lenu (PCR), o le jẹ daju pe awọn atilẹba DNA yoo mu awọn nọmba ti awọn adakọ ni a million igba, ti o ni, nibẹ ni yio je alaye, ati awọn ti o yoo han awọn esi. Awọn ifamọ ipele jẹ gidigidi ga - diẹ sii ju dí marun ninu ogorun, eyi ti o jẹ awọn ifilelẹ ti awọn anfani ti yi ọna.

Awọn iyokù ti awọn molikula-jiini awọn ọna ti iwadi lori ndin ti ikore ọpọ idaako gangan ilọpo meji, niwon ninu apere yi àkókọ ayẹwo fihan kan pato oligonucleotide ọkọọkan pọ si ọgọrun kan ati mefa ni igba. Ani awọn asa okunfa ti iko ti awọn ti atẹgun eto significantly kekere ti awọn oniwe-ifamọ. Eleyi jẹ idi ti igbalode oogun wa ni da lori molikula jiini awọn ọna ti okunfa ti iko. A ti ṣàpèjúwe ọna ti o jẹ doko paapa nigbati awọn olugbagbọ pẹlu pathogens ti ga antigenic oniyepupọ, mọ pe ona miiran jẹ Elo siwaju sii soro - nilo pataki onje media ati gbigbin igba pipẹ. Biokemika ati molikula jiini awọn ọna gbe awọn gan o yatọ si ipa lori awọn esi.

okunfa ti iko

Marshall PCR okunfa ti iko julọ commonly lilo awon DNA lesese ti o wa ni pato fun gbogbo awọn mẹrin orisi ti ni arun na. Lati se aseyori yi ìlépa igba lo awọn ẹrọ ibugbamu ti o ri ọkọọkan WA eroja (WA-986, WA-6110), bi awọn wọnyi eroja se apejuwe gíga migratory eya Mycobacterium iko ati ki o nigbagbogbo bayi ọpọ awọn adakọ ni ara eniyan. Tun DNA isediwon le ti wa ni ti gbe jade lati funfun asa ati isẹgun (sputum ti alaisan) nipa eyikeyi miiran ọna ti o dara. Fun apẹẹrẹ, nibẹ ni Ariwo ọna ibi ti awọn lysis saarin ti lo da lori awọn guanidine thiocyanate ati yanrin bi awọn ti ngbe DNA. Awọn nọmba ti alaisan ti o yato dara bacteriological jijẹ gbogbo odun, ati Nitorina ni isẹgun iwa ti iṣeto a patapata ti o yatọ ipele ti agbari: molikula-jiini ọna ti keko DNA ti a ti ndun kan pataki ipa ninu awọn okunfa.

Sugbon, a gbọdọ gba wipe o ni ko lai drawbacks. The PCR ọna ti o jẹ awọn lilo ti igba mu kan tobi nọmba ti eke-rere esi, ati awọn idi jẹ ko nikan imọ aṣiṣe, sugbon o tun awọn ẹya ara ẹrọ ti awọn ọna ara. Ni afikun, lilo yi ọna ti awọn okunfa lati mọ awọn ṣiṣeeṣe ti mycobacteria, eyi ti o ti a ti mọ, o jẹ nìkan soro. Ṣugbọn yi daradara ni ko pataki julọ. Molikula jiini awọn ọna ti PCR àyẹwò fa awọn ewu ti kontaminesonu ti mycobacterial DNA. Iwe eri awọn ibeere fun idi eyi ti fun PCR kaarun še ti iyasọtọ lile, won beere mẹta lọtọ agbegbe ile. PCR ọna ti jẹ igbalode ati ki o gidigidi eka, o nilo awọn lilo ti o yẹ itanna ati ki o ga-oṣiṣẹ eniyan.

bacterioscopy

Nigbati awọn okunfa esi ti awọn onínọmbà gbọdọ wa ni akawe pẹlu awọn miiran data: isẹgun ibewo, radiography, smear maikrosikopiki, irugbin ati paapa esi si kan pato itọju ni o wa gidigidi pataki. Ni yi jara, awọn PCR ẹrọ jẹ nikan ni ọkan ninu awọn irinše. Ri awọn pathogen ni kutukutu okunfa le jẹ awọn alinisoro ati quickest ọna - bacteriological.

Nibẹ ti lo a ina maikirosikopu (kikun Ziehl-Neelsen) ati Fuluorisenti (kikun fluorochromes). Awọn anfani ni iyara smear awọn esi. Ṣugbọn awọn oniwe-drawback ti wa ni daradara ka awọn lopin agbara nitori lati kekere ifamọ. Sibẹsibẹ, yi ọna ti ni a fun WHO recommendation bi awọn julọ-aje ati awọn ilẹ lati ri iko alaisan. Erin ti mycobacteria bacteriological ọna ni o p iye ati ifoju quantitatively kokoro excretion. Elo siwaju sii igboya lati wo pẹlu ti o molikula jiini iwadi awọn ọna ti iko.

asa

Dara erin ti mycobacteria da asa-ẹrọ. Sowing pathological awọn ohun elo ti o ti wa ni ṣe sinu awọn ẹyin alabọde: Mordovsky, Finn II, LJ, ati bi. Aṣepari ti resistance ti mycobacteria to oogun ati aiṣe-eri ti ndin ti awọn nọmba kan ti mycobacteria ati awọn won ko iti ni fitiro, ti o ba ti loo ọna ti iwadi asa. Lati mu awọn ogorun ti ipinya ti mycobacteria inoculation ti pathological awọn ohun elo ti wa ni waye lori ọpọ ayika.

Pade awọn aini ti afonifoji asa, pathogen pẹlu eleyinju ati fifa. Lo ni yi eto ati aládàáṣiṣẹ iwon iru VANTES idagba. Ogbin gbọdọ wa ni waye ni abeabo fun soke si meje to mẹjọ ọsẹ. Nipa akoko yi ni irugbin pẹlu awọn aini ti idagba le ti wa ni kà odi. Awọn julọ ti ọna lati ri Mycobacterium iko ro ti ibi ayẹwo: aisan awọn ohun elo ti infect Guinea elede, eyi ti o wa lalailopinpin ni ifaragba si jẹdọjẹdọ.

diẹ ninu awọn isiro

Awon aaye ti iwadi, eyi ti a ti la nipa PCR àyẹwò, je awọn iwadi ti M. iko - wiwaba ikolu. Awọn igbalode Erongba ti jẹdọjẹdọ ikolu ni imọran wipe jade kan ti a ọgọrun enia ti o wà ninu olubasọrọ pẹlu M. iko, aadọrun-le daradara wa ni ikolu, sugbon nikan mẹwa ti wọn wa ni lọwọ arun ti wa ni a ni idagbasoke. Awọn miran ni TB ajesara, ati nitori aadọrun ogorun ti awọn igba miran awọn ikolu maa wiwaba. Ri a Àpẹẹrẹ ti o ti se iranwo a molikula jiini ọna.

Geneticists so pe aadọta-marun ogorun ti awon ti ogbin pathological awọn ohun elo ti o wà odi, ati ọgọrin ogorun ti awọn eniyan ikolu pẹlu M. iko, ṣugbọn ti nṣàn fun ko si síse manifestations ti arun, PCR rere ti şe gba. O ti wa ni a jiini aisan ọna iranwo lati da alaisan ni ewu nipa PCR ẹrọ, pẹlu awọn esi ti won itupale (maikrosikopiki ati asa) won odi, ati subclinical ikolu M. iko wà bayi.

igbalode iwadi

The Russian Federation ati bacteriological kaarun lo ohun onikiakia ọna ti awọn idi ifọkansi: iyọ reductase aṣayan iṣẹ ti mycobacteria idanwo nipa Griess reagent. Anti-jẹdọjẹdọ awọn ile-iṣẹ lo kan ọna ti o fun laaye lati mọ oògùn resistance. Eleyi seeding ni omi media, ibi ti aládàáṣiṣẹ radiometric ati Fuluorisenti iṣiro eto idagbasoke ti mycobacteria. Iru ohun onínọmbà ti wa ni ṣe ni kiakia - soke si meji ọsẹ.

Lọwọlọwọ, titun ọna ti wa ni a ni idagbasoke: oògùn resistance ti mycobacteria ni won ni irujini ipele. Iwadi ti awọn molikula sise ti resistance Jiini ati ki o fihan niwaju ninu mycobacteria. Awọn wọnyi ni Jiini ti wa ni nkan ṣe pẹlu resistance si awọn oloro. Fun apẹẹrẹ, kasA Jiini, inhA, katG sooro si isoniazid, rpoB pupọ - rifampicin 16Sp RNA Jiini ati rpsL - streptomycin, emb1 - lati ethambutol, gyrA - a fluoroquinolone ati bẹ bẹ lori.

awọn iyipada

Awọn igbalode okunfa significantly pọ si awọn molikula-jiini ipele ọna fun keko DNA ati ki o laaye lati gbe jade tobi-asekale-ẹrọ ti awọn iyipada ni gbogbo wọn julọ.Oniranran. Bayi a mọ pe awọn wọpọ awọn iyipada ninu awọn 516, 526 ati 531 codons awọn rpoB pupọ, o si mọ ti awọn resistance si orisirisi oloro. Nibẹ ni kan gbogbo ibiti o ti awọn ọna fun awọn titẹ ti mycobacteria lilo ko nikan ibile ọna - biokemika, ti ibi ati asa, sugbon tun gbajumo ni lilo igbalode molikula jiini imuposi. Tẹlẹ nibẹ ni o wa ni deedee ki o si pese awọn ti o tọ okunfa ọna fun awọn erin ti monogenic arun. Wọn ti wa ni orisun lori DNA ẹrọ ni awọn gangan agbegbe ti kan pato pupọ. Eleyi jẹ maa n kan eka ilana, akoko n gba ati ki o gbowolori, ṣugbọn awọn data ti o ti pese nipa molikula jiini onínọmbà, ni Elo diẹ deede ati alaye ju awọn data ti gbogbo awọn miiran itupale.

O ti gun a ti mọ pe awọn DNA ko ni yi fun gbogbo aye ti awọn oni-ti o jẹ ni eyikeyi nucleated ẹyin odnakova, ki o si yi mu ki o ṣee ṣe lati ya awọn igbekale ti Egba gbogbo ẹyin ti ara, ni eyikeyi ipele ti ontogeny. Awọn ti bajẹ pupọ le ṣee wa-ri ṣaaju ki o to hihan akọkọ àpẹẹrẹ si awọn full-asekale isẹgun arun, bi daradara bi ni ilera heterozygous eniyan, sugbon nini kan iyipada ninu awọn pupọ. Molikula jiini hereditary arun aisan ọna gba lati fi han awọn oniwe-(taara ona, DNA-àyẹwò), bi daradara bi lati itupalẹ awọn ipinya ti arun ninu ebi pẹlu sibomiiran agbegbe DNA (jiini Polymorphisms), eyi ti wa ni pẹkipẹki sopọ pẹlu kan ti bajẹ pupọ (ie, awọn aiṣe-ona ti DNA-àyẹwò). Taara tabi fi ogbon ekoro - eyikeyi DNA àyẹwò wa ni da lori awọn ọna ti idamo a muna telẹ ìka ti awọn eniyan DNA.

taara ọna

Dari awọn ọna ti DNA okunfa ni o wa nigbati awọn culprit pupọ hereditary arun ti wa ni mo, bi daradara mo, ati awọn orisi ti awọn oniwe-iyipada. Fun apẹẹrẹ, a dara taara ọna ni nọmba kan ti arun. Eleyi Huntington ká chorea (itẹsiwaju CTG-ntun), phenylketonuria (R408W), cystic fibirosis (delF508, pataki iyipada) ati bi. Awọn ifilelẹ ti awọn anfani ti awọn taara ọna ti o jẹ a patapata-ini aisan yiye, ati nibẹ ni ko si ye lati ṣe kan DNA onínọmbà ti awọn iyokù ti awọn ebi. Ti o ba ti a iyipada ninu awọn ti o baamu pupọ ni ri, o gba gangan gba a okunfa ti heredity, irujini ipinnu fun awọn iyokù ti awọn wuwo ebi.

Miran ti anfani ti taara okunfa ti wa ni ka lati da a heterozygous ti ngbe ti buburu awọn iyipada lati ebi ati awọn obi ti o ku lati ni arun na. Eleyi jẹ otitọ paapa fun awon arun autosomal recessive. Alailanfani ti taara ọna tun wa o si wa. Lati waye wọn, o nilo lati mọ pato localize awọn ajeji pupọ, exon-intron be ti awọn oniwe-julọ.Oniranran ati awọn oniwe-iyipada. Ko gbogbo monogenic arun loni ti gba iru alaye. Informativeness taara ọna ko le wa ni kà pari, nitori ọkan ati awọn kanna pupọ le ni kan ti o tobi nọmba ti pathological iyipada ti o fa idagbasoke ti hereditary arun.

aiṣe-ọna

Aiṣe-ọna ninu DNA àyẹwò ti wa ni lo ni gbogbo, ni awọn igba miran, ti o ba ti bajẹ pupọ ti ko ba mọ, sugbon nikan chromosomally, tabi ti o ba ila okunfa kò fun awọn esi (ti o ṣẹlẹ, ti o ba awọn pupọ eka molikula agbari tabi kan ti o tobi iye, ti o ba ti nibẹ ni o wa kan pupo pathological awọn iyipada). Aiṣe-ọna ošišẹ ti ipinya igbekale ti polymorphic asami ni allelic ebi. Asami ri ni kanna chromosomal ekun tabi ipo ti wa ni pẹkipẹki sopọ mọ si awọn arun ati ki o soju tabi awọn insertions, ojuami substitutions, ntun, ati awọn polymorphism jẹ nitori o yatọ si iye ti ẹyin ni awọn Àkọsílẹ.

Julọ rọrun fun awọn aiṣe-okunfa kà microsatellite ati minisatellite Polymorphisms, eyi ti o wa ni o gbajumo pin ninu awọn eniyan ara eniyan. wọn iye kosile ni ga alaye akoonu, ti o ba ti ibaje si jiini ijinna laarin awọn sibomiiran ati awọn pupọ ni ko ju tobi. Ninu awọn igbehin nla, awọn idiyelé rẹ yiye ti wa ni ti pinnu lati kan ti o tobi iye awọn igbohunsafẹfẹ ti ikojọpọ tuntun laarin awọn polymorphic sibomiiran ati ibaje. Aiṣe-aisan ọna tun pese dandan alakoko igbese ti allele nigbakugba ti awọn atupale olugbe iwadi laarin awon alaisan ati awọn ẹjẹ ti awọn iyipada, plus awọn tianillati se ti npinnu awọn iṣeeṣe ti ikojọpọ tuntun ti nonequilibrium ati gulu asami ati ẹranko alleles.

ọna miiran

Kukuru àáyá ti RNA tabi DNA, bi daradara bi nikan pupọ visualized labẹ airi iwadi ko le jẹ, nitorina, lati da awọn iyipada nilo nipa molikula jiini okunfa. Nibẹ ni a "Human ara eniyan Project", bi daradara bi miiran mura lati ni molikula Jiini gidigidi ti fẹ awọn seese ti awọn okunfa ti hereditary arun - mejeeji ma nwaye ati postnatal. Awọn wọnyi ni ọna le pese tete erin ati ki o ṣe kan p poly- ati monogenic arun, ti Uncomfortable gba ibi ni adulthood. Laanu, nitori awọn imọ agbara ti molikula jiini-ẹrọ wa ni ma ni ìha keji asa ifilelẹ lọ ti o ti seto ni ibatan si ilẹ-iní, paapa nigbati awọn okunfa jẹ ni adolescence ati ewe.

Igbekale ati ìtúwò chromosomal kẹtalelogun ni o wa ni wọpọ okunfa ti arun ati akàn, ati ọpọlọpọ awọn malformations. Chromosomal aberrations nilo lati wa ni mọ, eyi ti o jẹ pataki fun ebi Igbaninimoran - lati se ayẹwo awọn apesile, pẹlú pẹlu ibisi ewu ni ojo iwaju pregnancies. Akaşu-onínọmbà ni "goolu bošewa" ti jiini okunfa, sugbon o jẹ lopin. Nikan ni ọna ti molikula jiini onínọmbà le se diẹ, nitori nibẹ ni o lo ti ẹda oniye ọna orisun Fuluorisenti akole ti o lagbara ti won ga ifamọ lati da abele chromosomal ayipada ti o wa ni soro lati ri kilasika cytogenetic-ẹrọ. Awọn wọnyi ni imuposi ti wa ni increasingly jù wa aisan agbara, nigbati ayewo, awọn ọmọde pẹlu idagbasoke idibajẹ, opolo retardation, pẹlu ọpọlọpọ awọn miiran hereditary arun.

awari

O ti wa ni pataki fun eda eniyan wà ni pupọ be ati iṣẹ ti imo, orisi ti oniyepupọ, agbara lati ri hereditary arun ti o waye ni asopọ pẹlu awọn idagbasoke ti molikula Jiini. awọn oniwe-ọna ti wa ni Eleto ni awọn iwadi ti awọn DNA moleku - ati nigbati o jẹ deede, ati nigbati o ti wa ni ti bajẹ. Igbaradi ti deoxyribonucleic acid lesese ti nucleotides (DNA) pan ni ipo lati gba awọn ayẹwo lati da olukuluku ajẹkù. Ipinya ti jinomiki DNA lati ẹyin, hihamọ (tearing), alaye (ti ẹda oniye), electrophoresis ti awọn ajẹkù (yiya sọtọ wọn ina idiyele ati molikula àdánù nipa agarose jeli). Identification ti kan pato ajẹkù be lori dada ti a ọtọ adikala.

Ki o si sunmọ sinu awọn igbese pataki Ajọ, nipasẹ eyi ti o koja kọọkan ajeku ti arabara pẹlu cloned DNA ajẹkù tabi sintetiki ipanilara wadi ni a Iṣakoso, eyi ti yoo wa ni dogba si kọọkan igbeyewo ayẹwo. Ti o ba yi awọn ipo tabi ipari akawe pẹlu awọn ibere, ti o ba titun kan ajeku tabi mọ - gbogbo awọn yi ni imọran wipe awọn atupale pupọ ti koja atunṣeto ni Nucleotide ọkọọkan. Nibẹ ni o wa mẹjọ ipilẹ imuposi ti molikula jiini-ẹrọ: itẹlera (ipinnu ti DNA ọkọọkan), lati damọ pq lenu (ilosoke ninu awọn nọmba ti lesese), awọn igbaradi ti awọn ẹrọ ibugbamu mọ Jiini, DNA ti ẹda oniye, gbóògì ti apapo ohun ti ari awọn ọlọjẹ nitori apapo ohun ti, ṣiṣẹda kan pipe ṣeto (gbigba ìkàwé) cloned ajẹkù ti a gba nipa lilo hihamọ.